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  • 产品名称：即用型易错PCR试剂盒

  • 产品型号： 100T
  • 产品厂商：通蔚生物
  • 产品价格：1918
  • 产品库存：121
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简单介绍：
即用型易错PCR试剂盒易错 PCR 是在采用 DNA 聚合酶进行目的基因扩增时，通过调整反应条件来改变扩增过程中的突变频率，从而以一定的频率向目的基因中随机引入突变，获得蛋白质分子的随机突变体。其关键在于对合适突变频率的选择，突变频率太高会导致绝大多数突变为有害突变，无法筛选到有益突变；突变频率太低则会导致文库中全是野生型群体。本产品基于以上原理研制。
详情介绍：
产品特点

易错 PCR 是在采用 DNA 聚合酶进行目的基因扩增时，通过调整反应条件来改变扩增过程中的突变频率，从而以一定的频率向目的基因中随机引入突变，获得蛋白质分子的随机突变体。其关键在于对合适突变频率的选择，突变频率太高会导致绝大多数突变为有害突变，无法筛选到有益突变；突变频率太低则会导致文库中全是野生型群体。本产品基于以上原理研制。

它具有下列特点：
1. 操作简便；
2. 突变没有趋向性，突变率稳定，突变率为 0.66%；
3. 本产品只适用于扩增 1kb 以下的产物，对于1kb 以上的产物，建议分段扩增。
4. 可用于连续易错 PCR（sequential error-prone PCR）。

成分规格

产品组成
2×Error Prone PCR Mix　　　1.5 mL
10× MnCl2　　　　　　　　 300 μL

保存条件
-20℃可保存12个月

使用方法
1. 易错PCR体系　推荐反应体系（30μl）

试剂

用量

模板 DNA

10－100ng

Primer F (10 μM)

1μl

PrimerＲ(10 μM)

1μl

2× Error Prone PCR Mix

15μl

10× MnCl2

3μl

ddH2O

Up to 30μl


2.易错PCR程序
按用户已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR，如果没有优化的PCR条件，可先尝试下面的PCR程序。

过程

温度

时间

预变性

94℃

3min

30－60cycles

变性

94℃

30sec

退火

45℃

30sec

延伸

72℃

1min/kb

3. 结果检测：反应结束后取5 μl反应产物，加入适量上样缓冲液，然后进行琼脂糖凝胶电泳，检测是否得到预期片段大小的PCR产物。
4. 胶回收易错PCR扩增产物、克隆并对单菌落进行功能筛选或测序分析、如果需要增加突变率，可以突变后的DNA为模板，进行连续易错PCR。
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