产品详情
简单介绍：
M-MLV 反转录酶本产品采用大肠杆菌表达体系，是经过高度纯化的重组酶。该酶的RNA酶H活性很低，具有更高的热稳定性，广泛应用于首链 cDNA 的合成，反转录温度高达55°C，特异性和 cDNA 产量明显提高，长度明显大于首、二代反转录酶。本产品适合于从各种组织中提取的总 RNA 或 mRNA 为模板合成 cDNA 首链、实时荧光定量RT-PCR、3’-和 5’-RACE 等。
详情介绍：
产品特点
本产品采用大肠杆菌表达体系，是经过高度纯化的重组酶。该酶的RNA酶H活性很低，具有更高的热稳定性，广泛应用于首链 cDNA 的合成，反转录温度高达55°C，特异性和 cDNA 产量明显提高，长度明显大于首、二代反转录酶。本产品适合于从各种组织中提取的总 RNA 或 mRNA 为模板合成 cDNA 首链、实时荧光定量RT-PCR、3’-和 5’-RACE 等。
它具有下列特点：
它具有下列特点：
1. 逆转录效率高，首链 cDNA 产量高；
2. 长可合成 5 kb 的 cDNA 片段；
3. 逆转录反应的模板总 RNA 范围可以在 10 ng-5 μg 之间。。
成分规格
|
产品组成 |
规格 |
|
M-MLV 反转录酶(200 U/μl) |
50μl/500μl |
|
5×RT Buffer(含 0.25M DTT) |
1ml/5*1ml |
|
-20℃，有效期 1 年 |
|
|
本产品仅供科研使用 ，不得用于其它用途 |
|
使用方法
（注 意：总反应体积为20 μl，总RNA的量为10 ng - 5 μg，若起始RNA的量小于50 ng，则建议加入RNA酶抑制剂RNasin）
1. 将5× RT Buffer和M-MLV 反转录酶溶解并置于冰上备用，准备好RNA模板、引物（oligo dT，随机引物，或者二者的Primer Mix、或者特异性引物），dNTPMix、DEPC-ddH2O等。
2. 在无 RNase的PCR管中加入引物，总 RNA (10 ng - 5 μg)或mRNA(1 - 500 ng)，4μldNTP (2.5 mM each)，4 μl 5 × RT Buffer，1 μl M-MLV 反转录酶，补足DEPC-ddH2O至 20 μl。
3. 振荡混匀，离心数秒使反应液聚集于 PCR 管底部。
4. 42℃保温 15-60 min。85℃孵育 5min，反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
5. 该产物可直接用于二链的合成或 RT- PCR 扩增反应，保存请置于-20℃。