二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)测试盒
测定方法: 分光光度法
测定规格: 50管/24样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意 : 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
二磷酸核酮糖羧化酶(EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一个关键酶,既控制着CO2的固定,同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流,其活性的大小直接影响着光合速率。
测定原理:
在Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)与1分子的CO2结合,产生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA),PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用,产生甘油醛-3-磷酸,并使还原型辅酶I(NADH)氧化。因此,340nm吸光度的变化可计算还原型辅酶I氧化速率,还原型辅酶I氧化速率可反应Rubisco的活性。
需自备的仪器和用品:
可见-紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液一:液体25mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液体25mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:30mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入12.5mL试剂一,充分混匀待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入12.5mL试剂一,充分混匀待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂四:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入1.25 mL试剂一,充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
(注意:试剂二、三、四溶解后,按需分装-20℃保存。)
