海藻糖6磷酸合成酶(TPS)测试盒
测定方法: 分光光度法
测定规格: 50管/48样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
海藻糖是由两个葡萄糖分子以α,α-1-1 糖苷键连接而成的一种非还原双糖,广泛存在于酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆虫、无脊椎动物和高等植物等多种有机体中。海藻糖的非还原性决定了它对酸、碱、高温等的稳定性。另外,它本身具有很强的吸水性,使它在生物体内具有抗脱水作用,在逆境条件下可通过识别外界刺激、产生和传递信号、基因表达和代谢调节来保护植物免受环境的伤害。
植物体内主要以葡萄糖为底物合成海藻糖,该反应首先在海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)的作用下,催化尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)和 6-磷酸葡萄糖反应生成中间产物6-磷酸海藻糖,再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶 (trehalose6-phosphate phosphatase,TPP)的作用下去磷酸化,生成海藻糖。因此,测定TPS活性对于研究植物逆境具有重要意义。
测定原理:
TPS 催化 UDPG 与 G6P 生成海藻糖-6-磷酸,同时产生 UDP;UDP 在丙酮酸激酶与乳酸脱氢酶作用下,氧化 NADH 为 NAD+,NADH 的下降速率与 UDP 含量成正比,通过 340nm 吸光度下降速率反映 TPS 活性。
需自备的仪器和用品:
分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 10mL 试剂五溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂二:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 25mL 试剂五溶解;现配现用;
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存;临用前加入 0.1mL 试剂五溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂四:100μL×1 瓶,4℃避光保存;临用前低速离心,以防止试剂沾在管壁;试剂五:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
工作液的配制:临用前,先配置好 1 瓶试剂二和试剂三,然后在试剂二瓶中加入 25μL 试剂三和 25μL 试剂四,充分混匀,现配现用。