结合态淀粉合成酶(GBSS)测试盒
测定方法: 分光光度法
测定规格: 50管/48样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GBSS(EC 2.4.1.21)以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链淀粉的合成。
测定原理:
GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP;进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比,通过340nm下测定NADPH的增加量,可以计算GBSS活性。
需自备的的仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体60mL×2瓶,4℃保存;
试剂一:50mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入14mL试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入8mL试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入17mL试剂一充分混匀备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂五:液体×1支,-20℃保存;临用前加入1mL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入1mL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
粗酶液制备
称取0.1~0.2g组织(建议称取约0.1g组织),加入1mL提取液,冰浴中匀浆。10000g ,4℃离心10min,弃上清,在沉淀中加入1mL提取液充分混匀,置冰上待测。