果糖1,6二磷酸酶(FBP)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/96样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意 : 式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
果糖-1,6 二磷酸酶又称果糖 1,6 二磷酸酯酶,催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和无机磷,在糖的异生代谢和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。
测定原理:
FBP 催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和无机磷,在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH,340nm 下测定 NADPH 增加速率,即可计算 FBP 活性。
需自备的仪器和用品:
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理:
①总FBP酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定。
②胞浆和叶绿体FBP酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一),冰浴匀浆后于4℃,200g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃,8000g离心10min,取上清用于测定胞浆FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定叶绿体中FBP酶活性。
建议测定总FBP酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FBP,则按照步骤②提取粗酶液。
