果糖激酶(FRK)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/96样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
蔗糖是大多数高等植物从源到库运输的主要形式, 但进入库器官后被分解为果糖和葡萄糖, 果糖在进入下一步代谢前必须由果糖激酶或己糖激酶进行磷酸化,以帮助库组织的建立和库强的提高。果糖激酶是催化果糖磷酸化的主要酶,还可以作为植物的己糖感受器和信号分子, 通过影响植物的生长周期来调控植物的代谢和进程,在库组织中发挥重要的作用。因此,研究果糖激酶对研究植物中果糖代谢调节机制具有十分重要的意义。
测定原理:
FRK 催化果糖合成 6-磷酸果糖,6-磷酸果糖在磷酸己糖异构酶的作用下异构为 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADH,NADH 在 340nm 有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理:
1、培养细胞:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
