海藻糖6磷酸酯酶(TPP)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/48样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
海藻糖又称为漏芦糖、蕈糖,是由两个葡萄糖分子组成的一个非还原性双糖,能够在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下在细胞表面形成独特的保护膜,有效地保护生物分子结构不被破坏,从而维持生命体的生命过程和生物特征。
植物体内主要以葡萄糖为底物合成海藻糖,海藻糖-6-磷酸酯酶 (trehalose 6-phosphate phosphatase,TPP)是该途径中海藻糖合成关键酶之一,该反应首先在海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)的作用下,催化尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)和 6-磷酸葡萄糖生成中间产物6-磷酸海藻糖,再在TPP的作用下去磷酸化,生成海藻糖。
测定原理:
TPP 催化海藻糖-6-磷酸产生海藻糖,同时释放出磷酸根,使用钼锑抗比色法测定。
需自备的仪器和用品:
酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样品测定的准备:
1、细胞的处理:收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复 30 次);8000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织的处理:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),冰浴中匀浆。8000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
