NAD苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/96样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中 MDH 是 TCA 循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中 MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH 在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天-冬氨-酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH 分为 NAD-依赖的 MDH 和 NADP-依赖的MDH,中通常只含有 NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体中。
测定原理:
NAD-MDH 催化 NADH 还原草酰乙酸生成苹果酸,导致 340nm 处光吸收下降。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标-仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
样本测定的准备:
1、细胞或组织样品的制备:
培养细胞:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 1000~2000:1 的比例(建议 2000 万或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。