纤维素含量(CLL)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/96样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意 : 正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖,通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起,是植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维,是自然界中分布广、含量 一种多糖。
测定原理:
纤维素为β-葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在强酸作用下,可脱水生成β-糠醛类化合物。β-糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合,生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。
样品的前处理:
1、细胞壁的提取:取约0.3g样本,加入1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,90℃水浴20min(加热过程中EP管可能爆开,建议用胶带封口或使用防爆EP管),冷却至室温,6000g 25℃离心10min,弃上清。沉淀加入1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(涡旋振荡2min左右,6000g 25℃离心10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入1mL试剂一(去除淀粉)浸泡15小时,6000g 25℃离心10min,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM)。
2、纤维素的提取:称取烘干的CWM 约5mg,加入0.5mL蒸馏水充分匀浆(若烘干物质质地坚硬,可先研碎后再加入0.5mL蒸馏水匀浆,或者用匀浆器匀浆),匀浆液转移至EP管中,用蒸馏水定容至0.5mL,置于冰水浴中,缓慢加入0.75mL浓硫酸,混匀,冰水浴中静置30min。8000g 4℃离心10min,取上清液,用蒸馏水稀释20倍后待测。
