还原糖含量测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/48样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意 : 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等,是常见的单糖和双糖,其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物,也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。
测定原理:
加热促进碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的浓度范围内,还原糖含量与540nm吸光度成线性关系,根据标准曲线,即可求出样品中还原糖的量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水。
样品中还原糖的提取:
1、细胞的处理:收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3S,间隔10S,重复30次),转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中40min并且振荡8~10次,8000g,25℃离心10min,取上清供测定用。
2、组织的处理:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),冰浴匀浆,转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中40min并且振荡8~10次,8000g 吧,25℃离心10min,取上清供测定用。
3、血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(mL):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL试剂一),冰浴匀浆,转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中40min并且振荡8~10次,8000g,25℃离心10min,取上清供测定用。
按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水),研磨成匀浆,95℃水浴10分钟(盖紧,以防止水分散失),冷却后,8000g,25℃离心10min,取上清液待测。
