海藻糖含量测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/96样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
海藻糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。由于海藻糖具有独特的不同于其他碳水化合物的生物学特性,能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。
测定原理:
蒽酮比色法。具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板﹑研钵、浓硫酸(不允许快递)和蒸馏水。
海藻糖提取:
1、细胞处理:收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复 30 次),室温静置 45min,振荡 3~5 次,冷却后,8000g,25℃离心 10min,取上清。
2、组织的处理:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),冰浴匀浆,室温静置 45min,振荡 3~5 次,冷却后,8000g,25℃离心 10min,取上清。
3、血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取 0.1mL 血清(浆)加入 1mL 提取液),冰浴匀浆,室温静置 45min,振荡 3~5 次,冷却后,8000g,25℃离心 10min,取上清。
按照组织质量(g):提取液1体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液1),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,弃上清,沉淀中加入1mL蒸馏水,充分震荡混匀,12000g 4℃离心10min,弃上清,沉淀中加入1mL提取液2 充分混匀,4℃浸提过夜,12000g 4℃离心20min,取上清置冰上待测。
