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ELISA细胞裂解液详细步骤
日期：2024-04-28 13:27
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摘要：常规样本处理方式
血液样本
血液样本分为全血、血浆、血清三种。简单描述:
全血: 全血=血浆+血细胞。
血浆: 全血加抗凝剂后离心分离出来的淡黄色液体是血浆。
血清: 全血不加抗凝剂而自然凝固后分离出来的，不含纤维蛋白原的淡黄色液体是血清。
血液样本是ELISA/液相实验常用的样本。在收集血液样本的过程中应避免溶血，因为红细胞在溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质，将会出现非特异性显色反应，导致检测结果不准确，出现假阳性结果。另外，样本还需要避免污染，因为其可能会导致样本含有内源性HRP，也会导致检测结果不...
常规样本处理方式
血液样本
血液样本分为全血、血浆、血清三种。简单描述:
全血: 全血=血浆+血细胞。
血浆: 全血加抗凝剂后离心分离出来的淡黄色液体是血浆。
血清: 全血不加抗凝剂而自然凝固后分离出来的，不含纤维蛋白原的淡黄色液体是血清。
血液样本是ELISA/液相实验常用的样本。在收集血液样本的过程中应避免溶血，因为红细胞在溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质，将会出现非特异性显色反应，导致检测结果不准确，出现假阳性结果。另外，样本还需要避免污染，因为其可能会导致样本含有内源性HRP，也会导致检测结果不准确。且要避免使用高血脂样本。脂质会影响抗原抗体的结合，从而影响测值的准确性。
3.细胞裂解液
①吸出培养板中的培养基，用胰蛋白酶消化细胞，再加入适量的培养基，将培养板上的细胞冲洗干净(悬浮细胞可以省略该步骤);
②将细胞悬浮液收集到离心管中，在2-8C条件下，以1000xg离心5分钟，再吸去培养基，用预冷PBS洗涤细胞3次;
③加入适量的预冷PBS(建议在使用前立即加入蛋白酶抑制剂)，重悬细胞。添加比例:约1x106个细胞加入150-250uLPBS重悬细胞;
④使样本在-20°C或-80°℃条件和室温条件下反复冻融，重复冻融过程数次，直至细胞完全裂解。也可使用超声波细胞破碎器，超声处理悬浮液来裂解细胞;
⑤2-8°℃条件下，以1500xg离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液。
血液样本
血液样本分为全血、血浆、血清三种。简单描述:
全血: 全血=血浆+血细胞。
血浆: 全血加抗凝剂后离心分离出来的淡黄色液体是血浆。
血清: 全血不加抗凝剂而自然凝固后分离出来的，不含纤维蛋白原的淡黄色液体是血清。
血液样本是ELISA/液相实验常用的样本。在收集血液样本的过程中应避免溶血，因为红细胞在溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质，将会出现非特异性显色反应，导致检测结果不准确，出现假阳性结果。另外，样本还需要避免污染，因为其可能会导致样本含有内源性HRP，也会导致检测结果不准确。且要避免使用高血脂样本。脂质会影响抗原抗体的结合，从而影响测值的准确性。
3.细胞裂解液
①吸出培养板中的培养基，用胰蛋白酶消化细胞，再加入适量的培养基，将培养板上的细胞冲洗干净(悬浮细胞可以省略该步骤);
②将细胞悬浮液收集到离心管中，在2-8C条件下，以1000xg离心5分钟，再吸去培养基，用预冷PBS洗涤细胞3次;
③加入适量的预冷PBS(建议在使用前立即加入蛋白酶抑制剂)，重悬细胞。添加比例:约1x106个细胞加入150-250uLPBS重悬细胞;
④使样本在-20°C或-80°℃条件和室温条件下反复冻融，重复冻融过程数次，直至细胞完全裂解。也可使用超声波细胞破碎器，超声处理悬浮液来裂解细胞;
⑤2-8°℃条件下，以1500xg离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液。