兔抗多克隆抗体效价检测说明

日期：2024-05-05 22:14

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摘要：

兔抗多克隆抗体效价检测：

1、2个参照:阴性参照为预取血血清，均以1抗起始浓度稀释(封闭稀释液);阳性参照为以前阳性血清

2、于96孔板中每孔滴加100ul，1ug/ml抗原，于4℃过夜，也可以37℃孵育2小时。

3、倒掉抗原溶液，每孔加入200ul的封闭液，4℃过夜或者37℃孵育2小时。

4、倒去封闭液，在吸水纸上拍打尽量吸干残留液体,用洗涤液洗板三次,每次尽量拍干残留液体,若要放置一段时间, 37℃烘干并用封口袋封好于-20℃存放。

5、取包被好的96孔板，**孔加入阴性参照液100ul，**孔加入阳性参照液100ul，第三孔加入1:500的待测抗血清，后续各孔在此基础上倍比稀释，于37℃孵育1 小时。

6、倒掉液体，用洗涤液洗板三次，拍干。每孔加入100ul的HRP标记的小鼠抗兔IgG（1：2000稀释），于37℃孵育45分钟。

7、倒掉液体，用洗涤液洗板三次，拍干。每孔加入100ul的TMB底物（Sigma 单组份TMB ）37℃孵育5—20分钟(根据颜色深浅来决定显色的时间)。

8、每孔加入50ul的终止液（2N H2SO4），在酶标仪上读取波长450nm处的吸光值。

抗体效价检测达到1万以上后可以对兔子进行终放血。