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  • 产品名称：2× Probe qPCR Master Mix(with ROX)

  • 产品型号： 5×1ml
  • 产品厂商：通蔚生物
  • 产品价格：276
  • 产品库存：104
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简单介绍：
2× Probe qPCR Master Mix(with ROX)本产品为2×预混荧光定量PCR反应体系，使用时只需加入模板、引物、ROX Reference Dye（用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差，根据不同荧光定量 PCR 仪选择使用）和水，使其工作浓度为1×，即可进行反应。
详情介绍：
产品特点
2 × Probe qPCR Master Mix 是专用于探针法实时荧光定量PCR 的预混体系，包含热启动 DNA Polymerase、PCR 优化的稳定剂和增强剂、dNTPs 和Mg2+，操作简便，主要用于基因组 DNA 靶序列和 RNA 反转录后 cDNA 靶序列检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP 基因型分析等，适用于不同类型探针法荧光定量。本产品为2×预混荧光定量PCR反应体系，使用时只需加入模板、引物、ROX Reference Dye（用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差，根据不同荧光定量 PCR 仪选择使用）和水，使其工作浓度为1×，即可进行反应。

它具有下列特点：
1. 高灵敏度：可以精-确定量低拷贝模板；
2. 高特异性：大限度的减少引物二聚体和非特异性产物；
3. 有效性：扩增效率高，CT 值更低。

成份规格

产品组成

规格

2×Probe qPCR Master Mix

1ml / 5×1ml

50 × ROX Reference Dye I

40μl / 200μl

50 × ROX Reference Dye II

40μl / 200μl

-20℃保存一年

本产品仅供科研使用　，不得用于其它用途


使用方法
（注 意：以下举例为常规qPCR体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化）
1.根据以下表格配置反应体系，总体积为20 μl

试剂

用量

终浓度

2×Probe qPCR Master Mix

10μl

1×

正义引物 (10μM)

0.5μl

0.25μM

反义引物 (10μM)

0.5μl

0.25μM

模板 DNA

xμl

/

探针(10μM)

0.5μl

0.25μM

ddH2O

Up to 20μl

/

50× ROX Reference Dye I or II

0.4μl

1×


注 意：
1）通常引物浓度以 0.25 μM 可以得到较好结果，可以在 0.1 ~ 1.0 μM 作为设定范围的参考。
2）使用的探针浓度，与使用的荧光定量 PCR 仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3）通常 DNA 模板的量以10-100 ng基因组 DNA或1-10 ng cDNA 为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定佳的模板使用量。
需使用 ROX Reference Dye I 的机型：
ABI Prism5700、7000、7300、7700、7900、7900HT、7900HT Fast、Step-One、Step-One Plus。
需使用 ROX Reference Dye II 的机型：
ABI Prism 7500/7500Fast、ViiA7, StratageneMX4000/MX3005P/MX3000P。
不需要使用 ROX 的机型：
Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4; Cepheid SmartCycler; Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene6000; Roche Applied Science LightCycler 480; Thermo Scientific PikoReal Cycler。
2. qPCR 反应程序，两步法 PCR：

过程

温度

时间

预变性

95℃

5min

35－40cycles

变性

95℃

15sec

 

退火／延伸

60℃

30sec

注 意：建议采用两步法 PCR 反应程序，若因使用 Tm 值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法 PCR 扩增，退火温度请以 55℃ - 65℃的范围作为设定参考）

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