线粒体呼吸链复合体Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶测试盒
测定方法: 分光光度法
测定规格: 24管/12样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意 : 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
线粒体复合体Ⅴ又称F1F0-ATP合酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成,也可逆过程水解ATP。此外,复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合中。复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。
测定原理:
复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi,通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:25mL×1瓶,-20℃保存;
试剂二:25mL×1瓶,-20℃保存;
试剂三:1 mL×1瓶,-20℃保存;
试剂四:粉剂×1支,-20℃保存;临用前每支加入1.3mL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂五:6mL×1瓶,4℃保存;
试剂六:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入3mL蒸馏水,充分混匀;溶解后4℃保存一周;
试剂七:粉剂×1瓶, 4℃保存;临用前加入10mL蒸馏水,充分混匀;溶解后4℃保存一周;
试剂八:粉剂×1瓶, 4℃保存;临用前加入10mL蒸馏水,充分混匀;溶解后4℃保存一周;
试剂九:液体10mL×1 瓶,室温保存。
定磷试剂的配制:按H2O: 试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷试剂应为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染(请根据需要,用多少配多少)。
注意:配试剂 用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,或者一次性塑料器皿,以避免磷污染。