产品详情
简单介绍：
通蔚生物公司具有深厚行业背景和丰富市场经验的专业人士组成，转氢酶-2测试盒致力于为生命科学研究领域提供产品，为广大科研工作者提供服务。
详情介绍：
转氢酶-2测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/96样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意 : 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
TH位于线粒体的内膜上,又称为线粒体复合体六,催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互转化,把逆向反应称为TH-2,催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。
测定原理:
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的转氢反应不能导致340nm吸光度发生变化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代NAD+,TH-2催化APAD+还原生成APADH,APADH在375nm有特征光吸收,测定375nm光吸收的增加速率,来计算TH-2活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理:
组织、或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
①准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
②将匀浆600g,4℃离心5min。
③弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
④上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的TH-2(此步可选做)。
⑤步骤④中的沉淀即为线粒体,加入500uL试剂二,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10秒,重复30次),用于TH-2活性测定。
