柠檬酸合酶(CS)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/48样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环 个限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。测定原理:
CS 催化乙酰 CoA 和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶 A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的 DTNB 转变成黄色的 TNB,在 412nm 处有特征吸光值。需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水样本的前处理:
组织、或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:①称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
②将匀浆 600g,4℃离心 5min。
③弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心 10min。
④上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的 CS(此步可选做)。
⑤在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),用于线粒体 CS 测定。
