土壤中性磷酸酶(S-NP)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100T/96S
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意 : 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
土壤磷酸酶是催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH的显著影响,根据适PH范围,一般把土壤磷酸酶分为中性、酸性和碱性三种类型。
测定原理:
中性环境中,S-NP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出NP活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。
催化反应:
称取风干混匀土壤约0.1g,加入50μL甲苯(自备),轻摇15min;加400μL试剂一并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应24h;到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。8000g,25℃离心10min,取上清液置于冰上待测。
显色反应:
1. 分光光度计预热30 min以上,调节波长到660 nm,蒸馏水调零。
2. 空白管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL蒸馏水,20μL试剂三,4μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后25℃静置30min,于660nm测定吸光度,记为A空白管。
3. 标准管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL标准液,20μL试剂三,4μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后25℃静置30 min,于660nm测定吸光度,记为A标准管。
4. 测定管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL上清液,20μL试剂三,4μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后室温25℃30 min,于660nm测定吸光度,记为A测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
