上海通蔚生物检测大鼠MAOA时如何避免假阳性结果

一、样本处理：源头减少干扰
规范样本采集与保存。血清需用无热原的试管，血液凝固后 3000 转离心 10 分钟取上清；血浆选择合适抗凝剂（如 EDTA），离心 30 分钟后收集上清，避免溶血或凝血不完全。
避免反复冻融。样本若不立即检测，应分装成小份（单次检测用量），-20℃或 - 80℃冷冻保存，解冻后一次性用完，反复冻融会导致蛋白变性，增加非特异性反应。
严格按说明书稀释。若样本中 MAOA 浓度过高，需用试剂盒配套的稀释缓冲液按比例稀释，避免因浓度超出线性范围导致假阳性，禁止使用其他缓冲液替代。
二、试剂管理：保证试剂有效性与特异性
试剂平衡与混匀。试剂盒从 2-8℃冰箱取出后，需在室温（20-25℃）平衡 20-30 分钟，避免温度差异影响反应；所有液体试剂（如抗体、底物）使用前需轻轻颠倒混匀，避免剧烈振荡产生气泡。
避免试剂交叉污染。加样时使用一次性移液器吸头，每吸取一种试剂或样本更换一个吸头；试剂瓶开封后，瓶口不要接触任何物品，剩余试剂按说明书要求密封保存，防止污染或挥发。
确认试剂有效期与批次。不使用过期试剂，不同批次的试剂盒组件（如酶标板、抗体）不可混用，批次间差异可能导致非特异性结合，增加假阳性风险。
三、操作流程：严格遵循标准步骤
控制温育条件。温育时需将酶标板用封板膜完全密封，防止液体蒸发或污染；37℃温育需在恒温箱或水浴锅中进行，确保温度稳定，避免因温育时间不足或温度波动导致反应不充分或非特异性结合。
规范洗板操作。手工洗板时，每孔需加满洗涤缓冲液，静置 1 分钟后彻底甩尽液体，在吸水纸上拍干，连续洗板 5 次；自动洗板机需确认洗液管路通畅，每孔注液量一致（通常 350μL），避免因洗板不彻底残留未结合抗体，引发假阳性。
及时终止与读数。显色反应完成后，立即加入终止液，终止液需沿孔壁缓慢加入，避免产生气泡影响 OD 值；读数需在 15 分钟内完成，使用酶标仪在 450nm 波长下检测，确保仪器校准正常，避免读数误差。
四、环境与对照设置：排除外部干扰与验证结果
控制实验环境。实验需在洁净、无灰尘的实验室进行，避免阳光直射或强光照射（尤其是显色步骤，需避光孵育）；实验台面需清洁，避免残留其他蛋白类物质（如血清、组织液）污染试剂或酶标板。

设置空白对照与阴性对照。每次实验需设置空白孔（仅加稀释缓冲液和底物，不加样本和抗体）和阴性对照孔（已知不含 MAOA 的大鼠血清 / 血浆），若空白孔或阴性对照孔 OD 值过高，说明存在干扰，需排查原因后重新实验。

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