上海通蔚生物带您了解有关大鼠elisa试剂盒的说明

大鼠 ELISA 试剂盒是一种用于检测大鼠体内特定蛋白质、抗原或抗体的实验工具，广泛应用于生物医学研究、开发等领域。以下是关于大鼠 ELISA 试剂盒的详细说明：
检测原理：以双抗体夹心 ELISA 法为例，用抗大鼠目标分子的抗体包被于酶标板上，样品或标准品中的目标分子与包被抗体结合，游离成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠目标分子抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，形成免疫复合物，再次洗去游离成分。加入显色底物（TMB），TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450nm 波长处测 OD 值，目标分子浓度与 OD450 值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中目标分子的浓度。
试剂盒组成：以 96 孔配置的大鼠单胺氧化酶 A（MAOA）ELISA 试剂盒为例，通常包括 96 孔酶标板、塑料膜板盖、标准品、标准品稀释缓冲液、生物素标记的抗体、酶标记物、洗涤缓冲液、底物 A、底物 B、终止液、标本稀释液等。
规格与保存：常见规格有 96T 和 48T。保存温度一般为 2-8℃，有效期通常为 6 个月。
样本要求：可检测的样品形式包括血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清、相关生物液体等。样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。如血清需使用不含热原的试管，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞分离；血浆可用 EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000 转离心 30 分钟取上清等。
操作步骤：
准备工作：试剂盒从冰箱取出后，需在室温平衡 20 分钟。
加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；样本孔加待测样本 50μL，若样本需要稀释，先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL，空白孔不加。
温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
洗板：手工洗板时，甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次；自动洗板机则每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
显色：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
终止：每孔加入终止液 50μL。
测定：15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
计算：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
注意事项：
实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；若样本已经稀释，结果需乘以相应的稀释倍数才是样本实际浓度。
严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

所有液体组分使用前充分摇匀。

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