上海通蔚生物科技有限公司ELISA试剂盒在免疫学研究中的应用解析
一、核心作用机制
ELISA试剂盒基于抗原-抗体的特异性结合原理，通过酶促显色反应实现生物标志物的定量检测。其固相化抗体/抗原与样本中的靶标结合后，利用酶标二抗催化底物显色，颜色深浅与目标物浓度呈正相关。该方法灵敏度可达皮克级，适用于血清、血浆等体液样本的微量分析。
二、实验流程与操作要点
样本预处理
需对血清、细胞培养液等样本进行离心过滤，去除杂质与细胞碎片，确保检测准确性。
加样与孵育
将处理后的样本加入包被特异性抗体的微孔板（每孔100μL），37℃孵育30-60分钟促进抗原-抗体结合。
洗涤与标记
洗涤4-6次去除未结合物后，加入酶标二抗进行二次孵育，形成抗体-抗原-酶标复合物。
显色与读数
加入TMB等底物避光显色10-30分钟，终止反应后通过酶标仪测定450nm波长吸光度值，计算靶标浓度。
三、检测方法分类
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方法类型 |
适用场景 |
技术特点 |
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双抗体夹心法 |
大分子蛋白检测（如细胞因子） |
包被捕获抗体+检测抗体双重特异性 |
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竞争法 |
小分子或单表位抗原 |
标记抗原与样本抗原竞争结合体 |
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间接法 |
抗体滴度测定（如疫苗研究） |
酶标二抗放大信号，灵敏度高 |
四、免疫学研究应用场景
传染病机制研究
定量检测病原体抗体（如HIV、乙肝病毒），分析感染进程与免疫应答动态。
自身免疫病分析
通过检测抗核抗体、类风湿因子等自身抗体，辅助红斑狼疮、类风湿性关节炎的病理研究。
过敏与免疫调节
测定血清IgE水平，解析花粉、尘螨等过敏原的免疫反应强度。
五、质量控制要点
复孔设置：每个样本需做2-3个复孔，减少操作误差。
洗涤规范：每次洗板需浸泡30秒以上，彻底去除非特异性结合物。
标准曲线：必须同步绘制标准品浓度梯度，确保定量可靠性。
ELISA试剂盒凭借高灵敏度与标准化操作流程，已成为免疫学研究中抗体检测、细胞因子分析及免疫应答评估的核心工具。随着夹心法、化学发光法等技术的迭代，其在精准医学研究中的应用将进一步拓展。